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猪NLRP3蛋白的原核表达与多克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

作者： 张艳 1 ; 王文秀 1 ; 刘海隆 1 ; 曹宗喜 1 ; 谭树义 1 ;

作者机构： 1.海南省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 猪;NLRP3蛋白;原核表达;多克隆抗体

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2019 年 06 期

页码： 1075-1079

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了获得猪源NLRP3重组蛋白以及针对猪NLRP3蛋白的多克隆抗体,本试验采用原核表达技术对猪源NLRP3蛋白的主要抗原区域进行了截短表达与鉴定,并以重组蛋白为免疫原免疫兔制备兔抗NLRP3蛋白多克隆抗体。结果显示,经RT-PCR方法扩增到大小为864 bp的NLRP3蛋白的主要抗原区域基因;将目的片段定向克隆至pET-32α原核表达载体,转化大肠埃希菌BL21,经IPTG诱导获得了大小为50 000的重组蛋白;重组蛋白经纯化后Western blot检测其可与抗His标签单克隆抗体发生特异性反应;以纯化蛋白为免疫原制备的兔抗NLRP3蛋白多克隆抗体的抗体效价达1∶25 600,Western blot检测其可与NLRP3重组蛋白发生特异性反应。结果表明,获得了具有良好反应活性的NLRP3重组蛋白与多克隆抗体,为研究NLRP3蛋白的结构与功能、NLRP3蛋白与猪炎症性疾病的相互作用机制奠定了基础。

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