文献类型： 中文期刊
作者： 王晶 1 ; 朱喆 2 ; 张鹏 1 ; 毕延震 2 ;
作者机构： 1.中南民族大学生命科学学院
2.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎工程与分子育种湖北重点实验室
关键词： 单碱基编辑;宁乡花猪;MSTN基因;终止密码子
期刊名称： 中国畜牧兽医
ISSN： 1671-7236
年卷期： 2022 年 49 卷 008 期
页码： 2880-2887
收录情况： 北大核心
摘要： [目的]利用单碱基编辑器在宁乡花猪肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因第2外显子处引入终止密码子,以获得MSTNV基因表达沉默的肾成纤维细胞系,为后期培育MSTN碱基编辑猪奠定基础.[方法]首先在MSTN基因的第2外显子处设计1条单向导RNA(single guide RNA,sgRNA),将其连接至pMLM3636-puro质粒,形成重组表达载体pMLM3636-puro-MSTN,与含有红色荧光碱基编辑器YE1-BE3-FNLS共转入宁乡花猪肾成纤维细胞中,在红色荧光和嘌呤霉素双筛选条件下,挑取单克隆细胞,测序验证后,分析阳性单克隆细胞的蛋白表达情况.[结果]在MSTN基因第2外显子处发生了碱基定点突变,目标位点的氨基酸序列由色氨酸(TGG)转变成终止密码子(TAA),且G→A突变率为5.5%.Western blotting检测结果表明,试验组10号单克隆细胞的MSTN蛋白表达量与野生型相比降低了 60%.[结论]本研究运用单碱基编辑技术在宁乡花猪MSTN基因编码区引入终止密码子,使翻译提前终止,导致蛋白表达量显著降低,为后期MSTN基因碱基编辑猪的生产奠定基础.
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