文献类型： 中文期刊

作者： 朱俊儒 ¹ ; 韦唯 ² ; 裴党帅 ³ ; 张芬鹊 ⁴ ; 段瑜 ⁵ ; 郭永峰 ⁶ ; 江悦 ¹ ; 夏树立 ⁷ ; 韩静 ⁷ ; 侯金星 ⁸ ; 安小鹏 ¹ ;

作者机构： 1.西北农林科技大学动物科技学院

2.渭南市动物疫病预防控制中心

3.渭南市动物卫生工作站

4.渭南市农产品质量安全检验检测中心

5.陕西省渭南市农业技术推广中心

6.黄骅市农业农村局

7.天津市农业科学院畜牧兽医研究所

8.杨凌职业技术学院

关键词： PDCD4;miR-21-5p;奶山羊;凋亡;β-酪蛋白;TG

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2023 年 004 期

页码： 1429-1440

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在探究奶山羊程序性细胞死亡因子4（programmed cell death 4,PDCD4）对乳腺上皮细胞（goat mammary epithelial cells, GMECs）凋亡及乳成分的调控作用。本研究通过双荧光素酶报告试验验证miR-21-5p与PDCD4的靶向关系，通过RT-qPCR、Western blot试验检测miR-21-5p对PDCD4的调控作用；将PDCD4干扰小RNA（si-PDCD4）与PDCD4过表达载体（pc3.1-PDCD4）转染进GMECs以探究PDCD4对GMECs的影响，通过EdU、CCK-8试验检测转染后对GMECs增殖的影响，利用流式细胞术检测转染后对GMECs凋亡的影响；利用ELISA试剂盒检测转染后GMECs中β-酪蛋白和甘油三酯（TG）的分泌情况；最后通过Western blot试验检测转染后GMECs中PI3K、mTOR、S6K、ERK、Bcl-2、Bax等蛋白的表达。双荧光素酶报告试验结果表明，PDCD4与miR-21-5p靶向结合；EdU、CCK-8及流式细胞术试验结果表明，过表达PDCD4后GMECs活力显著降低（P＜0.01）,即PDCD4抑制GMECs增殖并促进GMECs凋亡（P＜0.01）,干扰PDCD4的表达后GMECs活力显著提高（P＜0.01）,GMECs的凋亡水平显著降低（P＜0.01）;ELISA试验结果表明，过表达PDCD4后GMECs中β-酪蛋白和TG的分泌量显著降低（P＜0.01）,降低PDCD4的表达后GMECs中β-酪蛋白和TG的分泌量显著上升（P＜0.01）;Western blot试验结果表明，与对照组相比，过表达PDCD4后磷酸化的PI3K、mTOR、S6K、ERK蛋白表达显著降低（P＜0.05）,Bax蛋白表达被显著上调（P＜0.01）,Bcl-2蛋白表达水平被显著下调（P＜0.01）;降低PDCD4的表达后，PI3K、mTOR、S6K、ERK的磷酸化蛋白表达显著提高（P＜0.05）,Bax的表达则显著下降（P＜0.05）,同时显著上调了Bcl-2的表达（P＜0.05）。本研究结果表明，PDCD4通过激活ERK/Bcl-2/Bax信号通路促进奶山羊乳腺上皮细胞的凋亡，并通过抑制PI3K/mTOR/S6K信号通路降低奶山羊乳腺上皮细胞中β-酪蛋白和TG的分泌，miR-21-5p在GMECs中与PDCD4靶向结合并调控其表达。