文献类型： 中文期刊

作者： 贾新月 ¹ ; 马静 ¹ ; 张艳艳 ² ; 马勋 ¹ ; 王正荣 ² ; 薄新文 ¹ ;

作者机构： 1.石河子大学动物科技学院

2.新疆农垦科学院畜牧兽医研究所省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室

关键词： 细粒棘球绦虫;EGR-07243基因;EGR-07244基因;生物信息学分析;原核表达

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2023 年 003 期

页码： 847-858

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】分析细粒棘球绦虫（Echinococcus granulosus）2个Kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因EGR-07243和EGR-07244的生物信息学特性，并进行原核表达，以期检测EGR-07243和EGR-07244蛋白的免疫原性。【方法】利用PCR扩增EGR-07243、EGR-07244基因全长序列，采用生物信息学软件对EGR-07243、EGR-07244蛋白的理化性质、结构特点及亲缘进化关系进行分析；构建重组质粒pET32a-EGR-07243、pET32a-EGR-07244并转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，利用SDS-PAGE检测蛋白的表达，并通过Western blotting对蛋白进行抗原性分析。【结果】EGR-07243基因全长228 bp,编码75个氨基酸，蛋白分子式为C₆₈₆H₁₁₄₆N₂₂₈O₂₉₂S₆₃,相对分子质量约19 258,含有3个B细胞抗原表位，理论等电点为5.30,脂肪系数为17.98,亲水性为0.714,为稳定蛋白；EGR-07244基因全长228 bp,编码75个氨基酸，蛋白分子式为C₆₇₅H₁₁₂₄N₂₂₈O₂₈₇S₅₆,相对分子质量约18 800,含有3个B细胞抗原表位，理论等电点为5.32,脂肪系数为20.61,亲水性为0.689,为稳定蛋白。二者氨基酸序列相似性为72.00%。二者与绦虫属的功能结构域氨基酸序列一致性为95%以上，亲缘关系极近；而与人的功能结构域氨基酸序列一致性为46.3%,亲缘关系较远。通过双酶切鉴定及测序分析证明，pET32a-EGR-07243、pET32a-EGR-07244重组质粒构建成功。重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞后成功诱导表达蛋白，Western blotting结果显示，2种蛋白能被感染原头蚴的犬阳性血清识别且不被健康犬血清识别，表明其均具有良好的反应原性。【结论】EGR-07243和EGR-07244蛋白能够作为预防细粒棘球绦虫感染的疫苗免疫靶点，结果为抗包虫病疫苗候选分子的筛选提供了试验材料。