文献类型： 中文期刊
作者： 陈松彪 1 ; 刘翔 1 ; 彭海英 2 ; 巩万奎 1 ; 王锐 1 ; 王锋 2 ; 朱祯 1 ;
作者机构： 1.中国科学院遗传与发育生物学研究所
2.福建省农业科学院
关键词： CRE/LOX;基因剔除;转基因水稻;抗虫;SCK;CRYIAC;无选择标记
期刊名称： 植物学报
ISSN： 1672-9072
年卷期： 2004 年 012 期
页码： 1416-1423
收录情况： CSCD
摘要： CRE/LOX系统通过其CRE重组酶对LOX序列进行切割和重新连接,介导LOX序列发生特异性重组.利用重组报告基因系统PACTIN-LOX-HPT-LOX-GUSA,对CRE/LOX系统在水稻(ORYZASATIVA L.)中介导转基因的剔除进行了研究.PACTIN-LOX-HPT-LOX-GUSA系统中选择标记HPT基因侧翼含两个同向LOX位点,并位于水稻ACTINL启动子和GUSA基因之间.当HPT在CRE酶作用下被剔除时,ACTINL启动子可以和GUSA基因融合在一起从而驱动GUS表达.通过农杆菌介导获得了分别转CRE基因、PACTIN-LOX-HPT-LOX-GUSA结构和双价抗虫基因LOX-HPT-LOX-SCK-CRYIAC结构的水稻.利用有性杂交方法将CRE基因导入到转化LOX结构的植株中.在4个转PACTIN-LOX-HPT-LOX-GUSA T0植株*转CRE T0植株所配组合的30个杂交F1植株中,12个植株表达GUS活性,9个表现潮霉素敏感,表明HPT基因被剔除.研究进一步通过CRE/LOX介导剔除转双价抗虫SCK+CRYIAC基因籼稻恢复系明恢86材料基因组中的选择标记HPT基因.在9个转LOX-HPT-LOX-SCK-CRYIACT2代纯合植株*转CRET2代纯合植株所配组合的77个杂交F1植株中,56个植株表现潮霉素敏感.分子分析证实在这些对潮霉素敏感的植株中HPT基因已经被剔除.
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