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利用共转化方法创制携带Pi9抗稻瘟病基因的无选择标记转基因水稻

文献类型: 中文期刊

作者: 潘龙玉 1 ; 李军 1 ; 王歆 1 ; 刘中来 1 ; 赵建华 1 ; 刘雄伦 1 ; 戴良英 1 ; 毛雪琴 1 ; 瞿绍洪 1 ;

作者机构: 1.浙江师范大学化学与生命科学学院;浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所;湖南农业大学作物种质创新与资源利用省重点实验室;浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所

关键词: 水稻(Oryza sativa);共转化;稻瘟病(Magnaporthe oryzae);转基因植物;选择标记

期刊名称: 分子植物育种

ISSN: 1672-416X

年卷期: 2020 年 02 期

页码: 433-443

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 水稻稻瘟病是由子囊菌(Magnaporthe oryzae)引起的水稻灾害性病害。培育抗病品种是防治稻瘟病最经济有效的措施之一。水稻Pi9抗稻瘟病基因来源于小粒野生稻并已被克隆和应用于转基因育种。为了提高无选择标记转基因植株的选择效率,将绿色荧光蛋白(GFP)用作可视遗传标记,对双菌株共转化系统进行改良:目的基因载体携带Pi9抗稻瘟病基因;标记基因载体用潮霉素磷酸转移酶(HPT)作为植物转化选择标记,用GFP作为负选择标记,筛除标记基因分离植株。两种载体的农杆菌转化株混合,分别与水稻品种‘浙恢414’、‘浙粳22’、‘浙11B’、‘日本晴’、‘空育131’和‘粤泰B’的愈伤组织共培养,然后从5%~38.3%的起始愈伤组织筛选获得了转化愈伤组织(HPT+GFP+)。对T0植株进行Pi9基因PCR检测,11.8%~77.8%的T0植株为共转化植株(HPT+GFP+Pi9+)。对共转化植株T1代进行绿色荧光检测,筛选阴性植株(GFP-),再通过PCR筛选Pi9+植株。根据13个T1群体的研究结果,61%的共转化植株在T1代分离出无选择标记转基因植株(HPT-GFP-Pi9+)。转Pi9的无选择标记植株和后代株系对水稻稻瘟病呈抗病反应。因此,本研究通过GFP标记提高了双菌株共转化系统的选择效率,转Pi9的无选择标记水稻株系为水稻抗稻瘟病育种提供了有用的遗传资源。

  • 相关文献

[1]共转化水稻植株T-DNA共整合结构的分子分析. 赵建华,李亚丽,刘中来,瞿绍洪. 2013

[2]转基因植物中删除选择标记基因的研究进展. 祁永斌,刘庆龙,陆艳婷,金庆生. 2014

[3]剔除转基因植物中选择标记的研究进展. 何海燕,周洁,李亚丽,赵建华,刘中来. 2012

[4]提高转基因植物安全性的策略. 应丹平,张恒木,陈剑平,曹明富. 2007

[5]转基因植物及其食品安全性评估方法. 徐俊锋,陈笑芸,孙彩霞,缪青梅. 2010

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