文献类型： 中文期刊

作者： 池洪树 ¹ ; 刘晓东 ² ; 郑在予 ² ; 龚晖 ² ; 柯巧珍 ² ; 林能锋 ³ ;

作者机构： 1.福建省农业科学院生物技术研究所/福建省水产病害防治工程技术研究中心;大黄鱼育种国家重点实验室

2.;福建省农业科学院生物技术研究所/福建省水产病害防治工程技术研究中心;大黄鱼育种国家重点实验室

3.;福建省农业科学院生物技术研究所/福建省水产病害防治工程技术研究中心;大黄鱼育种国家重点实验室;

关键词： 刺激隐核虫;幼虫;膜蛋白;单克隆抗体;白点病

期刊名称： 福建农业学报

ISSN： 1008-0384

年卷期： 2017 年 05 期

页码： 469-475

收录情况： 北大核心

摘要： 为获得刺激隐核虫幼虫膜蛋白单克隆抗体并初步分析单抗特性,提取刺激隐核虫幼虫膜蛋白,免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与SP2/O细胞融合,以间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞。通过ELISA方法检测单克隆抗体的亚类及效价;通过SDS-PAGE和western blot分析单抗特异性结合的蛋白,并以串联质谱方法对所识别条带进行鉴定;采用免疫荧光法分析单抗的抗原结合位点和特异性。结果得到3株能稳定分泌刺激隐核虫幼虫膜蛋白抗体的细胞株(5D11AG5、5H9BG3、6E11CE7)。这3株细胞株产生的抗体亚型均为IgM,ELISA效价分别为1∶3200、1∶25600、1∶51200。单抗5D11AG5和单抗5H9BG3株能够识别~35kDa的刺激隐核虫幼虫膜蛋白线性抗原表位,单抗5D11AG5所识别的蛋白与数据库中刺激隐核虫表面抗原蛋白、嗜热四膜虫微管蛋白(tubulin)的肽段具有较高覆盖率。免疫荧光结果显示单抗5D11AG5和单抗5H9DG3识别部位主要在虫体表面近胞口的前端,而单抗6E11CE7识别虫体表面外膜。刺激隐核虫幼虫膜蛋白单克隆抗体的制备,为刺激隐核虫功能性蛋白的筛选、纯化和功能分析提供了条件。