文献类型: 中文期刊
作者: 南黎 1 ; 黄叶娥 2 ; 肖琛闻 2 ; 王志鹏 2 ; 韦强 2 ; 季权安 2 ; 李科 2 ; 刘燕 2 ; 鲍国连 2 ;
作者机构: 1.浙江师范大学化学与生命科学学院
2.浙江省农业科学院畜牧兽医研究所
关键词: 细菌外膜囊泡;支气管败血波氏杆菌;制备工艺;蛋白质成分分析
期刊名称: 浙江大学学报(农业与生命科学版)
ISSN: 1008-9209
年卷期: 2021 年 002 期
页码: 251-260
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 本研究旨在确立兔波氏杆菌外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs)最佳制备工艺。以兔波氏杆菌毒力较强菌株FX-1为研究对象,筛选出制备OMVs的最优方法,并对培养时间、抗生素添加量及过滤方法进行逐一优化。采用透射电镜(transmission electron microscope, TEM)、扫描电镜(scanning electron microscope, SEM)、纳米颗粒追踪分析(nanoparticle tracking analysis, NTA)等方法分析OMVs的理化性质;采用考马斯亮蓝法(Bradford法)、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)及液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)检测OMVs的蛋白质含量及组分。试验结果显示,超滤浓缩法是制备兔波氏杆菌OMVs的较适方法,采用该方法的最佳培养时间、头孢氨苄质量浓度和过滤方法分别为18 h、64μg/mL和0.45μm滤膜过滤一次。制得的OMVs呈纳米级球形囊泡,平均直径为127.83 nm±0.68 nm。蛋白质分析结果表明,OMVs上包含多种与兔波氏杆菌毒力和感染机制有关的蛋白质。该制备工艺能够显著提高兔波氏杆菌OMVs的产量,为其工业化生产提供了可能;对其结构和蛋白质成分的分析,为研发新型亚单位疫苗提供了科学依据。
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