文献类型： 中文期刊

作者： 王小奎 ¹ ; 郭涛 ¹ ; 李村院 ¹ ; 李晓悦 ¹ ; 胡瑞瑞 ¹ ; 李雅心 ¹ ; 张云峰 ² ; 倪伟 ¹ ; 胡圣伟 ¹ ;

作者机构： 1.石河子大学生命科学学院

2.省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院

关键词： 猪流行性腹泻;毕赤酵母;纳米抗体;真核表达

期刊名称： 生物技术

ISSN：

年卷期： 2021 年 001 期

页码： 10-15

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]探究猪流行性腹泻病毒纳米抗体SH-Fc蛋白在毕赤酵母中的分泌表达情况,以期获得毕赤酵母表达系统,从而进一步研究PEDV的治疗方法。[方法]利用相关生物学分析软件对目的蛋白进行理化性质,磷酸化位点及二、三级结构的分析。将p UC57-SH-Fc质粒与酵母表达载体p PIC9K双酶切,构建真核表达载体p PIC9K-SH-Fc,经SalⅠ酶线性化后电转入毕赤酵母GS115中,利用G418抗性筛选以及菌落PCR的方法鉴定阳性菌株,阳性菌株经过30℃、0.8%甲醇诱导72 h,用SDS-PAGE和Western Blotting鉴定诱导表达后的上清液中蛋白表达情况。[结果]成功构建了真核分泌表达载体p PIC9K-SH-Fc,成功在毕赤酵母中表达目的蛋白,表达产物分子量与理论值55.1k Da相符合。[结论]成功诱导SH-Fc蛋白的分泌表达,获得了分泌表达目的蛋白的毕赤酵母表达系统,为后续研究PEDV的防治提供参考和奠定基础。