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基于密码子优化策略的牛妊娠相关糖蛋白9(bPAG9)的原核表达及纯化

文献类型： 中文期刊

作者： 卢春霞 1 ; 刘长彬 1 ; 石国庆 1 ; 杨华 1 ;

作者机构： 1.长江师范学院现代农业与生物工程学院;石河子大学动物科技学院;新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室

关键词： 牛妊娠相关糖蛋白;密码子;重组蛋白;原核表达

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2020 年 01 期

页码： 122-129

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了构建pET30a-bPAG9重组表达载体,并在BL21(DE3)感受态细胞中转染高效表达牛妊娠相关糖蛋白9(bPAG9),通过生物信息学技术对bPAG9基因进行密码子优化,人工合成bPAG9全基因序列,经双酶切法将bPAG9基因插入到表达载体pET30a中。将构建的重组质粒pET30a-bPAG9转染至BL21(DE3)感受态细胞中进行原核表达,经过超声波裂解和亲和层析方法获得重组蛋白bPAG9。用SDS-PAGE和Western Blot方法检测重组蛋白bPAG9的表达效果。结果显示,PCR扩增得到1 128 bp的优化bPAG9基因片段,构建的重组质粒pET30a-bPAG9经双酶切获得约5 244 bp和1 125 bp的2条片段,与预期值相符;对重组载体测序,测序结果与优化后的基因碱基序列完全一致,编码的氨基酸序列未发生突变;SDS-PAGE和Western Blot鉴定结果显示,获得相对分子质量约为4.0×10~4的bPAG9重组蛋白,通过亲和层析纯化后,重组蛋白bPAG9纯度到达90%以上。

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