文献类型: 中文期刊
作者: 管瑾 1 ; 郭一荻 1 ; 刘凌云 1 ; 尹淑霞 1 ; 滕珂 2 ;
作者机构: 1.北京林业大学草业与草原学院
2.北京市农林科学院草业花卉与景观生态研究所
关键词: 结缕草;原生质体;瞬时基因表达;亚细胞定位;蛋白互作
期刊名称: 草业学报
ISSN:
年卷期: 2023 年 007 期
页码: 61-71
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 为了结合转基因方法探索结缕草基因功能,建立高效、快速的结缕草原生质体制备及瞬时基因表达系统,利用正交试验对影响原生质体制备的主要因素进行优化,同时利用原生质体进行亚细胞定位和蛋白互作研究。结果表明,当酶配比为2%(w/v) cellulase R10和1.5%(w/v) macerozyme R10,酶解时间为7 h时,原生质体产量和活性均达到最高,分别为1.23×10~7个·mL-1和98%以上,满足后续转化所需。多次重复试验表明,加入5~10μg质粒,原生质体转化率可达75%以上。利用原生质体转化体系进行了亚细胞定位检测,结果发现结缕草ZjNOL和ZjNYC1定位在叶绿体中,ZjZFN定位在细胞核中。双分子荧光互补分析证明ZjNOL和ZjNYC1在叶绿体中相互作用。原生质体制备及转化方法与遗传学和组学技术相结合,能够为结缕草基因功能研究和基因编辑提供支持。
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