文献类型： 中文期刊

作者： 吕家轩 ¹ ; 张传健 ¹ ; 王志胜 ¹ ; 何青 ² ; 王继春 ¹ ; 费荣梅 ³ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院动物免疫工程研究所

2.常州同泰生物药业科技有限公司

3.南京农业大学动物医学院

关键词： 伪狂犬病病毒;细菌人工染色体;UL43;UL56;点突变;生物学特性

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2022 年 006 期

页码： 34-41

收录情况： 北大核心

摘要： 为探究UL43与UL56基因失活对伪狂犬病病毒（PRV）变异株毒力的影响，本研究基于伪狂犬病病毒（PRV）变异株AH02LA细菌人工染色体（BAC）BAC^PRV-G，应用En Passant操作技术，分别将UL43与UL56基因的起始密码子进行点突变，获得两株重组BAC株：BAC^PRV-G-UL43^mut与BAC^PRV-G-UL56mut。之后将携带同源臂的PRV AH02LA gE/gI基因分别于BAC^PRV-G-UL43^mut和BAC^PRV-G-UL56mut共转染猪睾丸（ST）细胞，从而获得重组病毒PRV-UL43^mut和PRV-UL56mut。生长动力学试验显示PRV-UL43^mut病毒滴度在感染后12 h有升高趋势，表明UL43基因可能在感染细胞早期抑制病毒增殖；PRV-UL56mut与亲本毒株PRV AH02LA生长动力学相似，表明UL56基因对病毒生长性能无显著影响。荧光定量PCR试验发现UL56基因可抑制感染细胞早期主要组织相容性复合物Ⅰ类分子的转录。此外，小鼠致病力试验显示，相较于亲本毒PRV AH02LA(LD₅₀=10^-3.26/0.2mL),PRV-UL43^mut(LD₅₀=10^-2.63/0.2 mL)与PRV-UL56mut(LD₅₀=10^-2.19/0.2 mL)对小鼠的致病力均降低，表明UL43基因与UL56基因可能介导病毒对小鼠的致病性。本研究成功构建了PRV变异株UL43、UL56基因失活株，为进一步揭示PRV免疫逃逸的机制奠定基础，也为研制更加安全有效的PRV弱毒疫苗提供理论依据。